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免疫磁珠集菌方法

更新時間:2017-07-13點擊次數(shù):1708

免疫磁珠集菌方法(IMS):
原理:用包被有O157:H7單克隆抗體的磁珠進行免疫磁性的分離方法。對待檢標本先進行增菌,然后再和抗O157:H7的磁珠共同孵育,zui后將磁珠-細菌混合物懸浮后涂于CT-SMAC平板或科瑪嘉O157:H7顯色平板進行分離培養(yǎng)。

操作步驟:
1、 取下磁板,將編號的1.5ml的Eppendorf離心管,置入Dynal     MPC-M架上。

2、 輕柔混勻抗 E.coilO157免疫磁珠 (反復顛倒,直到管底沉淀*消失),吸取抗E.coilO157免疫磁珠,置入每只編號的Eppendorf離心管20ul。

3、 取金標檢測陽性的樣品增菌培養(yǎng)物1ml,加入上述對應的Eppendorf離心管中。蓋緊蓋子。輕輕顛倒混勻。

4、置于Dynal  MX3旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上,室溫下,旋轉(zhuǎn)30分鐘(如果沒有旋轉(zhuǎn)器,可人工旋轉(zhuǎn))。

5、將磁鐵板插入Dynal  MPC-M架中,反復顛倒數(shù)次,將抗E.coilO157免疫磁珠吸附沉淀在Eppendorf離心管上。吸去上清(包括殘留在管蓋上的液體),并棄掉。

6、將磁鐵板從Dynal  MPC-M架抽出。每只Eppendorf離心管中加入1mlPBS-Tween20(pH7.4),輕輕顛倒混勻,重新懸浮免疫磁珠。

7、重復5-6步驟。

8、重復5步驟。

9、用80-100 ul PBS-Tween20(pH7.4) 重新懸浮免疫磁珠細菌混合物。
PBS-Tween20(pH7.4)配方:
KH2PO4              0.2g
NaH2PO4 · 12H2O      2.9g
NaCL                 8.0g
KCL                  0.2g
Tween-20              0.5ml
加水至1000ml

 

 

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